Остеоартритисот (ОА) е една од долгорочните хронични дегенеративни заболувања на коските и зглобовите што ги погодува постарите лица над 65 години [
1]. Општо земено, пациентите со остеоартритис се дијагностицираат со оштетена 'рскавица, воспален синовиум и еродирани хондроцити, што предизвикува болка и физички стрес [
2]. Артритичната болка е претежно предизвикана од дегенерација на 'рскавицата во зглобовите поради воспаление, а кога 'рскавицата е сериозно оштетена, коските можат да се судрат една со друга предизвикувајќи неподнослива болка и физички тешкотии [
3]. Вклученоста на воспалителни медијатори со симптоми како што се болка, оток и вкочанетост на зглобот е добро документирана. Кај пациенти со остеоартритис, воспалителни цитокини, кои предизвикуваат ерозија на 'рскавицата и субхондралната коска, се наоѓаат во синовијалната течност [
4]. Две главни поплаки што генерално ги имаат пациентите со остеоартритис се болка и синовијално воспаление. Затоа, примарните цели на тековните терапии за остеоартритис се намалување на болката и воспалението. [
5] Иако достапните третмани за остеоартритис, вклучувајќи нестероидни и стероидни лекови, имаат докажана ефикасност во ублажувањето на болката и воспалението, долготрајната употреба на овие лекови има сериозни здравствени последици како што се кардиоваскуларни, гастроинтестинални и бубрежни дисфункции [
6] Според тоа, за третман на остеоартритис мора да се развие поефикасен лек со помалку несакани ефекти.
Природните здравствени производи стануваат сè попопуларни поради нивната безбедност и леснотијата на располагање [
7]. Традиционалните корејски лекови имаат докажана ефикасност против неколку воспалителни заболувања, вклучувајќи артритис [
8]. Aucklandia lappa DC. е позната по своите лековити својства, како што се подобрување на циркулацијата на чи за ублажување на болката и смирување на желудникот, и традиционално се користи како природен аналгетик [
9]. Претходните извештаи сугерираат дека A. lappa поседува антиинфламаторно [
10,
11], аналгетик [
12], антиканцерогени [
13] и гастропротективно [
14] ефекти. Различните биолошки активности на A. lappa се предизвикани од неговите главни активни соединенија: костунолид, дехидрокостусен лактон, дихидрокостунолид, костуслактон, α-костол, саусуреа лактон и костуслактон [
15]. Поранешни студии тврдат дека костунолидот покажал антиинфламаторни својства во липополисахаридот (LPS), кој ги индуцирал макрофагите преку регулирање на NF-kB и протеинскиот пат на топлотен шок [
16,
17] Сепак, ниедна студија не ги испитала потенцијалните активности на A. lappa за третман на остеоартритис. Сегашното истражување ги испитало терапевтските ефекти на A. lappa против остеоартритис користејќи (мононатриум-јодоацетат) MIA и модели на глодари индуцирани со оцетна киселина.
Мононатриум-јодоацетат (MIA) е познато дека се користи за производство на голем дел од болните однесувања и патофизиолошките карактеристики на ОА кај животните [
18,
19,
20]. Кога се инјектира во зглобовите на коленото, MIA го нарушува метаболизмот на хондроцитите и предизвикува воспаление и воспалителни симптоми, како што се ерозија на 'рскавицата и субхондралната коска, кардиналните симптоми на остеоартритис [
18]. Реакцијата на грчење предизвикана со оцетна киселина е широко прифатена како симулација на периферна болка кај животни каде што воспалителната болка може квантитативно да се измери [
19]. Клеточната линија на глувчешки макрофаги, RAW264.7, е популарно користена за проучување на клеточните одговори на воспаление. По активирање со LPS, RAW264 макрофагите ги активираат воспалителните патишта и лачат неколку воспалителни посредници, како што се TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS и IL-6 [
20]. Оваа студија ги евалуираше антиноцицептивните и антиинфламаторните ефекти на A. lappa против OA кај животински модел на MIA, животински модел индуциран со оцетна киселина и LPS-активирани RAW264.7 клетки.
2. Материјали и методи
2.1. Растителен материјал
Сувиот корен од A. lappa DC. што се користеше во експериментот беше набавен од Epulip Pharmaceutical Co., Ltd. (Сеул, Кореја). Беше идентификуван од проф. Донгхун Ли, Оддел за билна фармакологија, полковник по корејска медицина, Универзитет Гачон, а бројот на примерокот на ваучерот беше депониран како 18060301.
2.2. HPLC анализа на екстракт од A. lappa
A. lappa беше екстрахиран со помош на апарат за рефлукс (дестилирана вода, 3 часа на 100 °C). Екстрахираниот раствор беше филтриран и кондензиран со помош на испарувач со низок притисок. Екстрактот од A. lappa имаше принос од 44,69% по сушење со замрзнување под -80 °C. Хроматографската анализа на A. lappa беше спроведена со HPLC поврзан со помош на HPLC-систем 1260 InfinityⅡ (Agilent, Pal Alto, CA, САД). За хроматско одвојување, беше користена колона EclipseXDB C18 (4,6 × 250 mm, 5 µm, Agilent) на 35 °C. Вкупно 100 mg од примерокот беше разреден во 10 mL 50% метанол и соникиран 10 минути. Примероците беа филтрирани со филтер-шприц (Waters Corp., Milford, MA, САД) од 0,45 μm. Составот на мобилната фаза беше 0,1% фосфорна киселина (A) и ацетонитрил (B), а колоната беше елуирана на следниов начин: 0–60 мин, 0%; 60–65 мин, 100%; 65–67 мин, 100%; 67–72 мин, 0% растворувач Б со брзина на проток од 1,0 mL/мин. Отпадот беше набљудуван на 210 nm користејќи волумен на инјектирање од 10 μL. Анализата беше извршена во три примероци.
2.3. Сместување и управување со животни
Машки стаорци Спрег-Доли (SD) на возраст од 5 недели и машки глувци ICR на возраст од 6 недели беа купени од Samtako Bio Korea (Гјеонги-до, Кореја). Животните беа чувани во просторија со константна температура (22 ± 2 °C) и влажност (55 ± 10%) и циклус светлина/темнина од 12/12 часа. Животните беа запознаени со состојбата повеќе од една недела пред да започне експериментот. Животните имаа ad libitum залиха на храна и вода. Сегашните етички правила за нега и ракување со животни на Универзитетот Гачон (GIACUC-R2019003) беа строго следени во сите процедури за експериментирање со животни. Студијата беше дизајнирана како слепа од истражувачот и паралелна студија. Го следевме методот на еутаназија според упатствата на Комитетот за етика на експериментирање со животни.
2.4. Инјекција и третман на MIA
Стаорците беа случајно поделени во 4 групи, имено лажна, контролна, индометацин и A. lappa. Бидејќи беа анестезирани со 2% мешавина од изофлуоран О2, на стаорците им беше инјектирано 50 μL MIA (40 mg/m2; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, САД) интраартикуларно во зглобовите на коленото за да се доведе до експериментална остеоартритис. Третманите беа спроведени на следниов начин: контролните и лажните групи беа одржувани само со основна диета AIN-93G. Само групата со индометацин доби индометацин (3 mg/kg) инкорпориран во диетата AIN-93G, а групата со A. lappa од 300 mg/kg беше доделена на диета AIN-93G дополнета со A. lappa (300 mg/kg). Третманите беа продолжени 24 дена од денот на индукција на остеоартритис со брзина од 15-17 g на 190-210 g телесна тежина на дневна основа.
2.5. Мерење на тежината
По индукцијата на ОА, мерењето на капацитетот за носење тежина на задните екстремитети кај стаорците беше извршено со incapacitance-MeterTester600 (IITC Life Science, Woodland Hills, CA, САД) според распоредот. Распределбата на тежината на задните екстремитети беше пресметана: капацитет за носење тежина (%)
