Остеоартритисот (ОА) е една од долготрајните хронични дегенеративни заболувања на коскените зглобови што ја погодува постарата популација над 65 години [
1]. Општо земено, на пациентите со ОА им се дијагностицира оштетена 'рскавица, воспалена синовија и еродирани хондроцити, кои предизвикуваат болка и физички вознемиреност.
2]. Артритичната болка е претежно предизвикана од дегенерација на 'рскавицата во зглобовите со воспаление, а кога' рскавицата е сериозно оштетена коските може да се судрат една со друга предизвикувајќи неподнослива болка и физички тешкотии.
3]. Вклучувањето на воспалителни медијатори со симптоми како што се болка, оток и вкочанетост на зглобот е добро документирано. Кај пациентите со ОА, воспалителни цитокини, кои предизвикуваат ерозија на 'рскавицата и субхондралната коска, се наоѓаат во синовијалната течност.
4]. Две главни поплаки кои обично ги имаат пациентите со ОА се болка и синовијално воспаление. Затоа, примарните цели на сегашните терапии за ОА се намалување на болката и воспалението. [
5]. Иако достапните третмани за ОА, вклучително и нестероидни и стероидни лекови, имаат докажана ефикасност во ублажувањето на болката и воспалението, долготрајната употреба на овие лекови има сериозни здравствени последици како што се кардиоваскуларни, гастроинтестинални и бубрежни дисфункции.
6]. Така, треба да се развие поефикасен лек со помалку несакани ефекти за третман на остеоартритис.
Природните здравствени производи се сè попопуларни бидејќи се безбедни и лесно достапни [
7]. Традиционалните корејски лекови имаат докажано дејство против неколку воспалителни болести, вклучително и артритис.
8]. Aucklandia lappa DC. е познат по своите лековити својства, како што е подобрување на циркулацијата на Чи за ублажување на болката и смирување на желудникот, и традиционално се користи како природен аналгетик [
9]. Претходните извештаи сугерираат дека A. lappa поседува антиинфламаторни [
10,
11], аналгетик [
12], антиканцерогено [
13] и гастропротективно [
14] ефекти. Различните биолошки активности на A. lappa се предизвикани од неговите главни активни соединенија: костунолид, дехидрокосстус лактон, дихидрокостунолид, костулактон, α-костол, сосуреа лактон и костулактон [
15]. Претходните студии тврдат дека костунолидот покажал антиинфламаторни својства во липополисахаридот (ЛПС), кој ги индуцирал макрофагите преку регулација на патеката на протеинот NF-kB и топлински шок.
16,
17]. Сепак, ниту една студија не ги истражувала потенцијалните активности на A. lappa за третман на ОА. Сегашното истражување ги истражува терапевтските ефекти на A. lappa против ОА користејќи (мононатриум-јодоацетат) МИА и модели на глодари индуцирани од оцетна киселина.
Мононатриум-јодоацетат (МИА) е славно користен за производство на голем дел од однесувањата на болка и патофизиолошките карактеристики на ОА кај животните [
18,
19,
20]. Кога се инјектира во зглобовите на коленото, МИА го нарушува метаболизмот на хондроцитите и предизвикува воспаление и воспалителни симптоми, како што се ерозија на 'рскавицата и субхондралната коска, кардиналните симптоми на ОА.
18]. Одговорот на превиткување индуциран со оцетна киселина нашироко се смета како симулација на периферна болка кај животни каде што воспалителната болка може квантитативно да се измери [
19]. Клеточната линија на макрофагот на глувчето, RAW264.7, популарно се користи за проучување на клеточните одговори на воспаление. По активирањето со LPS, макрофагите RAW264 ги активираат воспалителните патишта и лачат неколку воспалителни посредници, како што се TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS и IL-6 [
20]. Оваа студија ги процени анти-ноцицептивните и антиинфламаторните ефекти на A. lappa против ОА кај животинскиот модел на МИА, животинскиот модел индуциран од оцетна киселина и клетките RAW264.7 активирани со LPS.
2. Материјали и методи
2.1. Растителен материјал
Исушениот корен на A. lappa DC. користен во експериментот беше набавен од Epulip Pharmaceutical Co., Ltd., (Сеул, Кореја). Тој беше идентификуван од проф. Донгун Ли, Оддел за хербална фармакологија, полковник за корејска медицина, Универзитетот Гачон, а бројот на примерокот на ваучерот беше депониран како 18060301.
2.2. HPLC анализа на екстракт од A. lappa
A. lappa беше екстрахиран со помош на апарат за рефлукс (дестилирана вода, 3 часа на 100 °C). Извадениот раствор беше филтриран и кондензиран со помош на испарувач со низок притисок. Екстрактот од A. lappa имаше принос од 44,69% по сушење со замрзнување под -80 °C. Хроматографска анализа на A. lappa беше спроведена со HPLC поврзан со користење на 1260 InfinityⅡ HPLC-систем (Agilent, Pal Alto, CA, USA). За хроматско раздвојување, колоната EclipseXDB C18 (4,6 × 250 mm, 5 µm, Agilent) беше користена на 35 °C. Вкупно 100 mg од примерокот се разреди во 10 ml од 50% метанол и се вршеше со соника 10 мин. Примероците беа филтрирани со филтер за шприц (Waters Corp., Milford, MA, USA) од 0,45 μm. Составот на мобилната фаза беше 0,1% фосфорна киселина (А) и ацетонитрил (Б) и колоната беше елуирана на следниов начин: 0-60 мин, 0%; 60–65 мин, 100%; 65-67 мин, 100%; 67–72 мин, 0% растворувач B со брзина на проток од 1,0 mL/min. Ефлуентот беше забележан на 210 nm користејќи волумен на инјектирање од 10 μL. Анализата беше направена во три примероци.
2.3. Домување и управување со животни
Машки Sprague-Dawley (SD) стаорци на возраст од 5 недели и машки ICR глувци на возраст од 6 недели беа купени од Samtako Bio Korea (Gyeonggi-do, Кореја). Животните биле чувани во просторија со константна температура (22 ± 2 °C) и влажност (55 ± 10%) и светло/темно циклус од 12/12 часа. Животните биле запознаени со состојбата повеќе од една недела пред да започне експериментот. Животните имаа ad libitum снабдување со храна и вода. Тековните етички правила за грижа и ракување со животните на Универзитетот Гачон (GIACUC-R2019003) беа строго почитувани во сите експериментални процедури со животни. Студијата беше дизајнирана заслепена од истражувач и паралелно испитување. Го следевме методот на евтаназија според упатствата на Одборот за етика на експерименти врз животни.
2.4. МИА Инјекција и третман
Стаорците беа случајно поделени во 4 групи, имено шам, контролна, индометацин и A. lappa. Кога биле анестезирани со 2% смеса од изофлуоран О2, стаорците биле инјектирани со употреба на 50 μL МИА (40 mg/m; Сигма-Олдрич, Сент Луис, МО, САД) интраартикуларно во зглобовите на коленото за да доведат до експериментална ОА. Третманите беа спроведени како што следува: контролните и лажните групи се одржуваа само со основна диета AIN-93G. Само, групата со индометацин доби индометацин (3 mg/kg) инкорпориран во AIN-93G диетата и A. lappa 300 mg/kg групата беше доделена на AIN-93G диета дополнета со A. lappa (300 mg/kg). Третманите продолжија 24 дена од денот на индукцијата на ОА со стапка од 15-17 g на 190-210 g телесна тежина на дневна основа.
2.5. Мерење на носење тежина
По индукцијата на ОП, мерењето на капацитетот за носење тежина на задните екстремитети на стаорците беше извршено со неспособност-MeterTester600 (IITC Life Science, Woodland Hills, CA, USA) како што беше закажано. Дистрибуцијата на тежината на задните екстремитети беше пресметана: носивост (%)
