Чисто Saposhnikovia divaricata масло за свеќи и сапун за производство на големо етерично масло за дифузер ново за дифузери за горилници за трска

краток опис:

 

2.1. Подготовка на СДЕ

Ризомите на SD беа купени како сушена билка од Hanherb Co. (Гури, Кореја). Растителните материјали беа таксономски потврдени од д-р Го-Ја Чои од Корејскиот институт за ориентална медицина (KIOM). Примерок од ваучер (број 2014 SDE-6) беше депониран во Корејскиот хербариум на стандардни билни ресурси. Исушените ризоми на SD (320 g) беа екстрахирани двапати со 70% етанол (со рефлукс од 2 часа) и екстрактот потоа беше концентриран под намален притисок. Лушпата беше филтрирана, лиофилизирана и складирана на 4°C. Приносот на исушен екстракт од сурови почетни материјали беше 48,13% (w/w).

 

2.2. Квантитативна анализа на течна хроматографија со високи перформанси (HPLC).

Извршена е хроматографска анализа со HPLC систем (Waters Co., Milford, MA, USA) и детектор со фотодиодна низа. За HPLC анализата на SDE, при-O- Стандардот за глукозилцимифугин е купен од Институтот за промоција на Кореја за индустрија за традиционална медицина (Гјеонгсан, Кореја) исек-О-глукозилхамаудол и 4'-O-β-Д-глукозил-5-O-methylvisamminol беа изолирани во нашата лабораторија и идентификувани со спектрални анализи, првенствено со NMR и MS.

Примероците на SDE (0,1 mg) беа растворени во 70% етанол (10 mL). Хроматографското раздвојување беше изведено со колона XSelect HSS T3 C18 (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, САД). Мобилната фаза се состоеше од ацетонитрил (А) и 0,1% оцетна киселина во вода (Б) со брзина на проток од 1,0 mL/min. Се користеше повеќестепена градиент програма на следниов начин: 5% A (0 мин), 5-20% A (0-10 мин), 20% A (10-23 мин) и 20-65% A (23-40 мин. ). Брановата должина на откривање беше скенирана на 210-400 nm и снимена на 254 nm. Волуменот на инјектирање беше 10,0μL. Стандардните раствори за определување на три хромони беа подготвени во конечна концентрација од 7,781 mg/mL (прим-O-глукосилцимифугин), 31,125 mg/mL (4'-O-β-Д-глукозил-5-O-метилвизаминол) и 31,125 mg/mL (сек-О-glucosylhamaudol) во метанол и се чува на 4°C.

2.3. Евалуација на антиинфламаторна активностИн витро

2.3.1. Клеточна култура и третман со примероци

RAW 264.7 клетки се добиени од American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA) и се одгледуваат во DMEM медиум кој содржи 1% антибиотици и 5.5% FBS. Клетките се инкубираат во навлажнета атмосфера од 5% CO2 на 37°C. За да се стимулираат клетките, медиумот беше заменет со свеж медиум DMEM и липополисахарид (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) на 1μg/mL беше додаден во присуство или отсуство на SDE (200 или 400μg/mL) за дополнителни 24 часа.

2.3.2. Определување на азотен оксид (NO), простагландин Е2 (PGE2), фактор на туморска некроза-α(TNF-α), и Производство на Интерлеукин-6 (ИЛ-6).

Клетките беа третирани со SDE и стимулирани со LPS 24 часа. Производството на NO беше анализирано со мерење на нитрит користејќи го реагенсот Griess според претходна студија [12]. Секреција на воспалителни цитокини PGE2, TNF-α, и IL-6 беше одреден со користење на комплет ELISA (системи за истражување и развој) според упатствата на производителот. Ефектите на SDE врз производството на NO и цитокини беа одредени на 540 nm или 450 nm користејќи Wallac EnVision™читач на микроплочи (PerkinElmer).

2.4. Евалуација на активноста на антиостеоартритисIn Vivo

2.4.1. Животни

Машки стаорци Sprague-Dawley (стари 7 недели) беа купени од Samtako Inc. (Осан, Кореја) и сместени под контролирани услови со 12-часовен циклус светлина/темна на°C и% влажност. На стаорците им беше обезбедена лабораториска исхрана и водаad libitum. Сите експериментални процедури беа извршени во согласност со упатствата на Националниот институт за здравје (NIH) и одобрени од Комитетот за нега и употреба на животните на универзитетот Даеџон (Даеџеон, република Кореја).

2.4.2. Индукција на ОА со МИА кај стаорци

Животните беа рандомизирани и доделени во групи за третман пред почетокот на студијата (по група). МИА раствор (3 mg/50μL од 0,9% физиолошки раствор) директно се инјектира во интраартикуларниот простор на десното колено под анестезија индуцирана со мешавина од кетамин и ксилазин. Стаорците беа поделени по случаен избор во четири групи: (1) група со физиолошки раствор без инјекција МИА, (2) група МИА со МИА инјекција, (3) група третирана со SDE (200 mg/kg) со МИА инјекција и (4 ) групата третирана со индометацин (IM-) (2 mg/kg) со МИА инјекција. Стаорците биле администрирани орално со SDE и IM 1 недела пред инјектирањето со МИА во тек на 4 недели. Дозата на SDE и IM користени во оваа студија се заснова на оние употребени во претходните студии [10,13,14].

2.4.3. Мерења на дистрибуција на тежинска шепа

По индукцијата на ОП, оригиналната рамнотежа во способноста за носење тежина на задните шепи беше нарушена. Беше користен тестер за неспособност (Linton instrumentation, Norfolk, UK) за да се проценат промените во толеранцијата за носење тежина. Стаорците беа внимателно ставени во мерната комора. Силата на носење тежина што ја врши задниот екстремитет беше во просек во период од 3 секунди. Односот на распределбата на тежината беше пресметан со следнава равенка: [тежина на десен заден екстремитет/(тежина на десен заден екстремитет + тежина на лева задна нога)] × 100 [15].

2.4.4. Мерења на серумските нивоа на цитокини

Примероците на крвта беа центрифугирани на 1.500 g за 10 минути на 4°C; потоа серумот беше собран и складиран на -70°C до употреба. Нивоата на IL-1β, IL-6, TNF-α, и PGE2 во серумот беа измерени со користење на ELISA комплети од R&D Systems (Минеаполис, MN, САД) според упатствата на производителот.

2.4.5. Квантитативна RT-PCR анализа во реално време

Вкупната РНК беше извлечена од ткивото на зглобот на коленото со користење на TRI реагенсот® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), обратно транскрибирана во cDNA и PCR-засилена со користење на TM One Step RT PCR комплет со SYBR зелена (Applied Biosystems , Гранд Ајленд, Њујорк, САД). Во реално време квантитативна PCR беше изведена со користење на Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR системот (Applied Biosystems, Grand Island, NY, САД). Секвенците на прајмер и низата на сонда се прикажани во Табела1. Делови од cDNA на примероци и еднаква количина на GAPDH cDNA беа засилени со TaqMan® Universal PCR мастер смеса која содржи ДНК полимераза според упатствата на производителот (Applied Biosystems, Foster, CA, USA). Условите на PCR беа 2 мин на 50°C, 10 мин на 94°C, 15 секунди на 95°C и 1 мин на 60°C за 40 циклуси. Концентрацијата на целниот ген беше одредена со помош на методот на компаративна Ct (број на праг на циклус на вкрстена точка помеѓу заговорот за засилување и прагот), според упатствата на производителот.

ФОБ Цена:САД $0,5 - 9.999 / парче

Мин. Количина на нарачка:100 Парче/парчиња

Способност за снабдување:10000 Парче/парчиња месечно