Чисто масло од Сапошниковија дивариката за производство на свеќи и сапуни, ново есенцијално масло од дифузер за трска

краток опис:

 

2.1. Подготовка на SDE

Ризомите на SD беа купени како сушена билка од Hanherb Co. (Гури, Кореја). Растителните материјали беа таксономски потврдени од д-р Го-Ја Чои од Корејскиот институт за ориентална медицина (KIOM). Примерок од ваучер (број 2014 SDE-6) беше депониран во Корејскиот хербариум на стандардни билни ресурси. Сушените ризоми на SD (320 g) беа екстрахирани двапати со 70% етанол (со 2-часовен рефлукс) и екстрактот потоа беше концентриран под намален притисок. Декотажата беше филтрирана, лиофилизирана и складирана на 4°C. Приносот на сушен екстракт од сурови почетни материјали беше 48,13% (w/w).

 

2.2. Квантитативна анализа со високо-перформансна течна хроматографија (HPLC)

Хроматографската анализа беше извршена со HPLC систем (Waters Co., Milford, MA, САД) и детектор за низа фотодиоди. За HPLC анализата на SDE, при-O-стандардот за глукозилцимифугин е купен од Корејскиот институт за промоција на индустријата за традиционална медицина (Гјеонгсан, Кореја) исек-О-глукозилхамаудол и 4'-O-β-D-глукозил-5-OА-метилвисаминолот беше изолиран во нашата лабораторија и идентификуван со спектрални анализи, првенствено со NMR и MS.

Примероците од SDE (0,1 mg) беа растворени во 70% етанол (10 mL). Хроматографското одвојување беше извршено со колона XSelect HSS T3 C18 (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, САД). Мобилната фаза се состоеше од ацетонитрил (A) и 0,1% оцетна киселина во вода (B) со брзина на проток од 1,0 mL/min. Користена е повеќестепена градиентна програма на следниов начин: 5% A (0 мин), 5–20% A (0–10 мин), 20% A (10–23 мин) и 20–65% A (23–40 мин). Брановата должина на детекцијата беше скенирана на 210–400 nm и снимена на 254 nm. Волуменот на инјектирање беше 10,0μЛ. Стандардни раствори за одредување на три хромони беа подготвени со конечна концентрација од 7,781 mg/mL (прим-O-глукозилцимифугин), 31,125 mg/mL (4′-O-β-D-глукозил-5-O-метилвисаминол), и 31,125 mg/mL (сек-О-глукозилхамаудол) во метанол и чувано на 4°C.

2.3. Евалуација на антиинфламаторната активностИн витро

2.3.1. Клеточна култура и третман на примероци

RAW 264.7 клетки беа добиени од American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA) и одгледувани во DMEM медиум што содржи 1% антибиотици и 5,5% FBS. Клетките беа инкубирани во влажна атмосфера од 5% CO2 на 37°C. За да се стимулираат клетките, медиумот беше заменет со свеж DMEM медиум и липополисахарид (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) на 1°C.μg/mL беше додадено во присуство или отсуство на SDE (200 или 400μg/mL) за дополнителни 24 часа.

2.3.2. Одредување на азотен оксид (NO), простагландин E2 (PGE2), фактор на туморска некрозаα(ТНФ-α), и производство на интерлеукин-6 (IL-6)

Клетките беа третирани со SDE и стимулирани со LPS во тек на 24 часа. Производството на NO беше анализирано со мерење на нитрит со помош на Griess реагенсот според претходна студија [12]. Секреција на воспалителни цитокини PGE2, TNF-α, а IL-6 беше определен со помош на ELISA комплет (системи за истражување и развој) според упатствата на производителот. Ефектите на SDE врз производството на NO и цитокини беа определени на 540 nm или 450 nm со помош на Wallac EnVision.™Читач на микроплочки (PerkinElmer).

2.4. Евалуација на антиостеоартритната активностИн виво

2.4.1. Животни

Машките стаорци од расата Sprague-Dawley (7 недели стари) беа купени од Samtako Inc. (Осан, Кореја) и сместени под контролирани услови со 12-часовен циклус светлина/темнина на°C и% влажност. На стаорците им беше обезбедена лабораториска исхрана и водаad libitumСите експериментални процедури беа извршени во согласност со упатствата на Националните институти за здравство (NIH) и одобрени од Комитетот за грижа и употреба на животни на Универзитетот Деџеон (Деџеон, Република Кореја).

2.4.2. Индукција на ОА со МИА кај стаорци

Животните беа рандомизирани и распределени во групи за третман пред почетокот на студијата (по група). Раствор на MIA (3 mg/50μ1/4 л од 0,9% физиолошки раствор) беше директно инјектиран во интраартикуларниот простор на десното колено под анестезија индуцирана со мешавина од кетамин и ксилазин. Стаорците беа поделени случајно во четири групи: (1) групата со физиолошки раствор без инјекција на MIA, (2) групата MIA со инјекција на MIA, (3) групата третирана со SDE (200 mg/kg) со инјекција на MIA и (4) групата третирана со индометацин (IM-) (2 mg/kg) со инјекција на MIA. На стаорците им беше администриран орално SDE и IM 1 недела пред инјекцијата на MIA во тек на 4 недели. Дозата на SDE и IM што се користеше во оваа студија се базираше на оние што се користеа во претходните студии [10,13,14].

2.4.3. Мерења на распределбата на тежината на задните шепи

По индукцијата на ОА, првичната рамнотежа во способноста за носење тежина на задните шепи беше нарушена. Тестер на неспособност (Linton instrumentation, Норфолк, Велика Британија) беше користен за да се проценат промените во толеранцијата на носење тежина. Стаорците беа внимателно сместени во мерната комора. Силата на носење тежина присутна од задниот екстремитет беше просечена во период од 3 секунди. Односот на распределба на тежината беше пресметан со следната равенка: [тежина на десниот заден екстремитет / (тежина на десниот заден екстремитет + тежина на левиот заден екстремитет)] × 100 [15].

2.4.4. Мерења на нивоата на серумски цитокини

Крвните примероци беа центрифугирани на 1.500 g во тек на 10 минути на 4°C; потоа серумот беше собран и складиран на -70°C до употреба. Нивоата на IL-1β, IL-6, TNF-α, и PGE2 во серумот беа мерени со помош на ELISA комплети од R&D Systems (Минеаполис, Минесота, САД) според упатствата на производителот.

2.4.5. Квантитативна RT-PCR анализа во реално време

Вкупната РНК беше екстрахирана од ткивото на коленото со помош на TRI reagent® (Sigma-Aldrich, Сент Луис, МО, САД), обратно транскрибирана во кДНК и PCR-амплифицирана со помош на TM One Step RT PCR комплет со SYBR зелена боја (Applied Biosystems, Гранд Ајленд, Њујорк, САД). Квантитативна PCR во реално време беше извршена со помош на Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR систем (Applied Biosystems, Гранд Ајленд, Њујорк, САД). Прајмерските секвенци и сондата-секвенца се прикажани во Табела.1Аликвоти од примероци на cDNA и еднаква количина на GAPDH cDNA беа амплифицирани со TaqMan® Universal PCR мастер смесата што содржи ДНК полимераза според упатствата на производителот (Applied Biosystems, Foster, CA, USA). Условите за PCR беа 2 минути на 50°C, 10 минути на 94°C, 15 секунди на 95°C и 1 минута на 60°C за 40 циклуси. Концентрацијата на целниот ген беше одредена со користење на компаративниот метод Ct (број на праг на циклус на вкрстена точка помеѓу графиконот за амплификација и прагот), според упатствата на производителот.

ФОБ цена:0,5 - 9.999 американски долари / парче

Мин. Количина на нарачка:100 парчиња/парчиња

Способност за снабдување:10000 парчиња месечно